甲氨蝶呤，与二氢叶酸还原酶有高亲和力，可竞争性地与二氢叶酸还原酶结合，阻止二氢叶酸还原成四氢叶酸，而影响DNA的合成，抑制肿瘤细胞的增殖。主要作用于细胞周期S期。临床应用于儿童急性淋巴性白血病疗效较好，对绒膜癌也有较好疗效。