葡萄糖进入细胞后发生磷酸化反应，生成6-磷酸葡糖。磷酸化后的葡萄糖不能自由通过细胞膜而逸出细胞。催化此反应的是己糖激酶，需要Mg2+。哺乳动物体内发现有4种己糖激酶同工酶（Ⅰ至Ⅳ型）。肝细胞中存在的是Ⅳ型，称为葡糖激酶。它对葡萄糖的亲和力很低，Km值为10mmol/L左右，而其他己糖激酶Km值在0.1mmol/L左右。此酶的另一个特点是受激素调控。这些特性使葡糖激酶在维持血糖水平和糖代谢中起着重要的生理作用。
己糖激酶专一性不强，受葡萄糖-6-磷酸和ADP的抑制，葡萄糖激酶只作用于葡萄糖，对葡萄糖的Km大，不受葡萄糖-6-磷酸抑制。 己糖激酶KM小，亲和性强，只有葡萄糖浓度很高时后者才起作用。